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体内外微生物核染色观察实验

发布者:admin 发布时间:2019-10-30 阅读:

1)
拿4
在5 ml塑料离心管中以12000 r / min的速度将大肠杆菌过夜离心1-2分钟,以获得5 ml的培养物,并弃去上清液。
2)
将细胞沉淀物悬浮在1。
将10μM10%SDS和20μl20 mg / ml蛋白酶添加到7 ml TE缓冲液中,混合并在37°C下水合1小时。
3)
加入3μl/ L NaCl 300μl,混合均匀,加入240μlCTAB / NaCl,混合并在65°C下建立水浴10分钟。
4)
加入等体积的苯酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)并以12000 r / min的速度混合5分钟。
5)
将上清液水相转移到另一个干净的塑料离心管中,并添加0。
六倍体积的异丙醇沉淀了DNA。
6)
快速离心几秒钟,弃去上清液,用70%乙醇冲洗DNA两次,真空干燥DNA沉淀并溶于300μlTE缓冲液。
通过这种方法获得的染色体DNA可用于分子生物学操作,例如用限制酶消化。
7)
取少量(约3-5μl)提取的DNA样品(其余保存在-20°C),加入3μl溴酚蓝上样缓冲液,并混合用于凝胶电泳的样品1-2小时琼脂糖。
在电泳过程中,将EB添加到琼脂糖中,并将EB插入DNA分子中。
8)
使用一次性塑料手套(EB是强大的诱变剂),用紫外线分析仪除去凝胶,观察染色体DNA的荧光带。